自上世紀(jì)50年代起，透析就已經(jīng)成為生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室分離生物大分子復(fù)合物的常用技術(shù)，雖然在很長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)，由于超濾及離心技術(shù)的推廣，透析技術(shù)并沒(méi)有得到很大的改進(jìn)，特別是傳統(tǒng)透析方式由于操作繁瑣，耗時(shí)等原因，會(huì)有不小的困擾。但現(xiàn)在，spectrumlabs推出了新一代即用型生物技術(shù)級(jí)透析裝置，使透析這項(xiàng)傳統(tǒng)的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，在使用的簡(jiǎn)便性和實(shí)用性方面得到了長(zhǎng)足的進(jìn)步。
 

透析是根據(jù)半透膜對(duì)大、小分子不同尺寸的選擇性擴(kuò)散過(guò)程，實(shí)現(xiàn)分離的技術(shù)。常見(jiàn)的蛋白質(zhì)或核酸樣品中，常會(huì)含有不需要的小分子物質(zhì)，如緩沖鹽溶液（Tris、PBS）、還原劑（二硫蘇糖醇DTT、β-巰基乙醇BME）或保存劑（醫(yī)用酒精、抗菌劑）等。

將樣品置于透析膜內(nèi)，透析液置于透析膜外（一般為樣品體積的200-300倍），使膜兩側(cè)形成濃度梯度，分子會(huì)從膜一側(cè)擴(kuò)散通過(guò)膜進(jìn)入另一側(cè)，并zui終達(dá)到平衡。一旦達(dá)到平衡，透析（擴(kuò)散）停止。通常情況下，接近平衡狀態(tài)時(shí)，擴(kuò)散速率會(huì)降低，所以每隔一段時(shí)間需要更換透析液，以維持濃度梯度，驅(qū)動(dòng)透析過(guò)程進(jìn)行。

膜的選擇是透析成功的關(guān)鍵。半透膜的孔徑需足夠大，以使小分子物質(zhì)通過(guò)，但同時(shí)又需足夠“小”，以限制大分子物質(zhì)。理想的透析膜需很“薄”、具有大小均一的膜孔、且不結(jié)合蛋白質(zhì)或核酸。常見(jiàn)的再生纖維素或纖維素酯即是較為理想的透析膜材質(zhì)選擇。

另一個(gè)影響透析膜選擇的重要參數(shù)是截留分子量（MWCO），我們將其定義為膜截留率至少為90%的分子的分子量。但在實(shí)際操作中，分子通過(guò)膜的擴(kuò)散過(guò)程還受到分子形狀、水合程度、離子電荷及極性等因素的影響，所以需做綜合測(cè)試及評(píng)估。

樣品和透析液的體積也是需要考慮的重要參數(shù)，理想的情況是較小的樣品體積使用較大的透析液體積，以使?jié)舛忍荻葄ui大化。需要考慮樣品體積是因?yàn)橥肝龊髽悠返奶幚砘驊?yīng)用通常具有一定的zui小體積要求。但是只要能滿足zui小體積要求，一般不推薦透析過(guò)多的樣品。因?yàn)榛诮o定樣品的膜表面積，小體積樣品的透析速率比大體積樣品要快得多。此外，樣品與固相界面接觸的時(shí)間越長(zhǎng)，樣品損失的可能性越高，蛋白質(zhì)或核酸發(fā)生非特異性結(jié)合或變性的幾率越大。

其它問(wèn)題關(guān)注
 

1）   膜的留分子量（MWCO）到底有多？

 MWCO可以作為衡量膜截留性能的指標(biāo)，但MWCO并不是的、的數(shù)值，所以選擇膜MWCO時(shí)，建議根據(jù)需要截留的大分子物質(zhì)和需要擴(kuò)散去除的小分子物質(zhì)，對(duì)不同MWCO的膜進(jìn)行測(cè)試，一般推薦膜MWCO為需截留物質(zhì)分子量的50-80%，同時(shí)需至少為需去除物質(zhì)分子量的100倍。

早期的透析膜產(chǎn)品因?yàn)樯a(chǎn)技術(shù)及質(zhì)控的原因，MWCO一般控制在2kD-20kD以內(nèi)，經(jīng)過(guò)技術(shù)革新，現(xiàn)在我們可提供截留分子量范圍更廣的透析膜產(chǎn)品，低至0.1kD，高可達(dá)1,000kD。每種規(guī)格的透析膜均具有特定的截留性能，可使用已知分子量的物質(zhì)對(duì)MWCO進(jìn)行檢測(cè)。

2）  透析時(shí)一定要攪拌嗎？
 

攪拌可顯著縮短透析時(shí)間。所有的膜都具有內(nèi)表面和外表面，從膜的樣品一側(cè)到透析液一側(cè)并沒(méi)有固定直徑的通道，相反，樣品中的小分子量物質(zhì)擴(kuò)散進(jìn)入內(nèi)表面的膜孔，然后通過(guò)膜內(nèi)部，再?gòu)哪ね獗砻娴哪た淄赋?，進(jìn)入膜外擴(kuò)散層“微環(huán)境”，擴(kuò)散層內(nèi)小分子物質(zhì)的濃度顯著高于透析液的其它位置。攪拌可快速、有效地打破擴(kuò)散層微環(huán)境，維持濃度梯度，保證透析進(jìn)行。

3）  透析溫度應(yīng)如何把握？
 

溫度對(duì)透析的進(jìn)行也有一定程度地影響，因?yàn)榉肿釉谳^高的溫度下會(huì)更快地移動(dòng)擴(kuò)散，但前提是操作溫度不影響產(chǎn)品的活性。所以，除特殊樣品外，一般在環(huán)境溫度或室溫下進(jìn)行即可。

4）  怎樣判定透析已經(jīng)結(jié)束？
 

判定透析結(jié)束并沒(méi)有簡(jiǎn)單、的標(biāo)準(zhǔn)。一般來(lái)說(shuō)，只要樣品中的小分子含量降低到不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)即可認(rèn)為透析完成。

5）  需要對(duì)膜進(jìn)行預(yù)處理嗎？
 

spectrumlabs透析膜出廠前已經(jīng)預(yù)處理。部分規(guī)格的膜產(chǎn)品可能含有少量的甘油或硫化物，正常情況下，這些小分子在透析過(guò)程中即可自動(dòng)擴(kuò)散去除。如處理的樣品較為敏感，也可在使用前用超純水對(duì)膜進(jìn)行預(yù)沖洗，對(duì)于在膜生產(chǎn)過(guò)程中可能存在的痕量重金屬，可使用重金屬漂洗液去除。

Spectra/Por Float-A-Lyzer G2即用型透析裝置（CE膜）采用預(yù)制型膜管，極大地提高了樣品/膜比表面積，可顯著縮短分子的遷移距離，使透析速率更快。同時(shí)Spectra/Por Micro Float-A-Lyzer微量即用型透析裝置可處理低至100μl的樣品，如使用較大量的透析液，維持高濃度梯度，即可得到*的透析速率。